研究背景與科學問題
肌萎縮側索硬化癥（ALS）和額顳葉癡呆（FTD）等神經退行性疾病的共同病理特征是TDP-43蛋白的細胞質異常聚集。作為核酸結合蛋白，TDP-43通過其N端結構域、兩個RNA識別基序（RRM1/RRM2）和C端低復雜度區域參與RNA代謝。超過97%的ALS患者中，TDP-43會錯誤定位到細胞質并形成毒性聚集體，而RRM結構域已被證實含有淀粉樣形成關鍵序列。盡管研究表明綠茶多酚EGCG可抑制多種致病蛋白（如α-突觸核蛋白、亨廷頓蛋白）的聚集，但其對TDP-43 RRM結構域的作用機制尚不明確。

研究設計與技術方法
意大利Fondazione Ri.MED等機構的研究團隊通過重組表達含RRM1-RRM2的TDP-43片段（K102-Q269），采用硫黃素T（ThT）熒光動力學監測EGCG對聚集動力學的影響，結合飽和轉移差（STD）和轉移核歐佛豪瑟效應（trNOE）核磁共振技術驗證相互作用。利用RoseTTAFold預測RNA-free的RRMs三維結構，通過化學位移擾動（CSP）和HADDOCK分子對接定位結合位點，最后經100 ns分子動力學（MD）模擬評估復合物穩定性。

關鍵研究發現

1. EGCG抑制TDP-43 RRMs體外聚集
   ThT實驗顯示，30 μM EGCG可使聚集成核期從10小時顯著延長，且終點熒光強度降低60%。顯微鏡觀察證實EGCG處理組淀粉樣聚集體數量減少，表明其通過干擾早期寡聚化抑制纖維形成。

2. EGCG與RRMs的直接相互作用
   STD-NMR檢測到EGCG芳香環質子信號，trNOE譜顯示結合態特征峰，證實兩者存在弱結合（K_d~μM級）。

3. RNA-free RRMs的結構特征
   RoseTTAFold模型顯示，無RNA時RRM1-RRM2呈開放構象，14氨基酸連接區具有高柔性。溫度系數分析（dδ_HN/dT < -5 ppb/K）驗證該模型與溶液狀態一致。

4. 結合位點與作用機制
   CSP分析鑒定出RRM1（L111/D174/D185）和RRM2（D247/K263）關鍵結合殘基。MD模擬揭示EGCG通過氫鍵（RRM1占據率78.59%）和π-π堆積（F147/F231）雙重作用穩定RRMs，其中RRM1結合更穩固。

科學意義與展望
該研究首次闡明EGCG通過"雙位點結合"模式（1:2化學計量）調控TDP-43 RRMs的構象動力學，提出"結構域特異性穩定"的新干預策略。值得注意的是，EGCG在還原劑（DTT）存在下才能維持活性，這解釋了既往研究中化合物不穩定的矛盾結果。盡管EGCG對RRMs的親和力較弱（毫摩爾級），但其多靶點特性（可同時作用于無序C端和結構化RRMs）為開發ALS/FTD的雞尾酒療法提供思路。未來需優化EGCG衍生物以提高血腦屏障穿透性和靶向性，并探索其與RNA競爭的生理相關性。

這項發表于《Scientific Reports》的工作將計算生物學（RoseTTAFold）、生物物理（NMR）和細胞病理學技術有機整合，為理解TDP-43相分離與聚集的分子開關提供了關鍵實驗證據，也為天然產物在神經保護中的應用樹立了機制研究的范式。