創傷性腦損傷（TBI）是全球重大健康挑戰，每年影響約6900萬人，但其診斷和預后評估仍缺乏高效生物標志物。盡管膠質纖維酸性蛋白（GFAP）、神經絲輕鏈（NfL）等血漿蛋白已被研究，但細胞外囊泡（EV）因其能穿越血腦屏障且穩定性高，可能更精準反映神經損傷。然而，現有EV研究存在方法學局限，如沉淀法導致的污染問題，且樣本量普遍較小。為此，丹麥奧胡斯大學醫院等機構的研究團隊在《Journal of Molecular Neuroscience》發表論文，系統評估了EV包裹的神經蛋白（EV-GFAP、EV-NfL等）在TBI中的診斷價值。

研究采用尺寸排阻色譜（SEC）分離血漿EV，結合納米顆粒追蹤分析（NTA）和高分辨率流式細胞術（hFCM）驗證EV純度，并通過單分子陣列（Simoa）檢測蛋白水平。隊列包含93例創傷患者（75例TBI，18例非TBI），在入院時、傷后15小時和72小時采集樣本，分析EV與血漿中GFAP等蛋白的動態變化。

方法驗證
SEC分離的EV粒徑集中在70-130 nm，hFCM檢測到CD9⁺CD63⁺CD81⁺標志物，且去垢劑處理后信號消失，證實EV特異性。蛋白釋放實驗顯示，Triton X-100處理顯著增加EV內GFAP等蛋白濃度，而超聲處理效果有限，提示EV包裹蛋白的穩定性。

EV-GFAP與TBI嚴重程度
EV-GFAP在TBI患者入院時和傷后15小時顯著高于非TBI組（p=0.02和p=0.05），且與Marshall評分（OR=2.19）和陽性頭CT結果（OR=3.10）相關，但與其他指標（如GCS評分）無關。EV-NfL、EV-T-Tau和EV-UCH-L1則無顯著差異。

血漿與EV標志物比較
血漿GFAP同樣與TBI嚴重程度相關，但其升高持續至72小時，而EV-GFAP僅早期顯著。兩者診斷效能相似（AUC=0.68），提示血漿檢測更具臨床實用性。

預后關聯
EV或血漿標志物均未顯示與1年死亡率或6-12個月功能結局（GOSE評分）的顯著關聯，可能因樣本量不足或EV反映急性損傷而非長期預后。

討論與意義
該研究首次通過嚴格方法學驗證，證實EV-GFAP可作為TBI急性期生物標志物，但其增量價值未超越血漿GFAP。SEC技術的低蛋白污染特性為EV研究提供了可靠平臺，但高變異系數（CV%達38%）提示需優化方法。未來需探索EV標志物在TBI病理機制中的獨特作用，如亞型分析或動態監測。盡管EV檢測尚難普及，本研究為TBI精準診療奠定了基礎，尤其為早期干預提供了潛在靶點。