在大腦的奇妙世界里，性別的奧秘隱藏在細微的神經元結構之中。視前區性雙態核（Sexually Dimorphic Nucleus, SDN）作為大腦性別差異的關鍵區域，其發育機制一直是神經科學領域的未解之謎。鈣結合蛋白 D-28K（Calbindin D-28K, Calb）陽性神經元作為 SDN 的重要組成部分，在雄性和雌性小鼠中數量存在差異，但這種差異何時出現、Calb 在 SDN 形成中扮演何種角色，長期以來困擾著研究者。傳統觀點認為，性激素通過調控神經元凋亡、吞噬或遷移等過程影響 SDN 的性別分化，但具體到 Calb?神經元的動態變化及分子機制，仍缺乏系統性研究。為揭開這些謎團，日本埼玉大學（Saitama University）的研究團隊開展了一系列實驗，相關成果發表在《Cell and Tissue Research》雜志上，為理解大腦性別差異的形成提供了新視角。

研究人員主要采用了以下關鍵技術方法：通過免疫組織化學染色（Immunohistochemistry）標記 Calb?神經元，結合立體學分析（Stereological Analysis）定量檢測出生后 5 天（PD5）至 20 天（PD20）小鼠 SDN 內 Calb?神經元數量及 SDN 體積變化；利用激光顯微切割（Laser Microdissection, LMD）技術分離 SDN 組織，通過逆轉錄定量 PCR（RT-qPCR）檢測 Calb1 mRNA 水平；采用腺相關病毒（AAV）載體介導的 Calb1 基因敲低（Knockdown, KD）技術，在新生小鼠視前區局部干擾 Calb1 表達，分析其對 SDN 神經元組成的影響。

免疫組織化學結果顯示，PD5 至 PD15 時，雌雄小鼠 SDN 內 Calb?神經元數量無顯著差異，但 PD20 雄性小鼠 Calb?神經元數量較 PD10、PD15 雄性及同階段雌性小鼠顯著增加（P<0.0001），SDN 體積也呈現雄性特異性增大。這表明 Calb?神經元的性別差異在出生后晚期（PD15-20）才正式建立，早于青春期啟動時間。

RT-qPCR 結果顯示，SDN 內 Calb1 mRNA 水平在 PD0 至 PD5 較低，PD10 后顯著升高（P<0.0001），但雌雄之間無顯著差異。這提示 Calb?神經元數量的性別差異并非由 Calb1 轉錄水平的性別差異驅動，可能與神經元遷移或存活等轉錄后機制相關。

在新生小鼠視前區注射 AAV-shCalb 病毒后，PD20 雄性小鼠右側 SDN 內 Calb?神經元數量較左側及對照組顯著減少（P<0.0001），總神經元數量（Calb?/Calb?神經元）也隨之下降，但 Calb?神經元及膠質細胞數量不受影響。這表明 Calb1 不僅是 Calb?神經元的標志物，更是 SDN 神經元聚集和組織不可或缺的分子。

本研究首次明確了小鼠 SDN 內 Calb?神經元性別差異出現于出生后 15-20 天，這一過程與雄性特異性的神經元遷移或整合增加有關，而非凋亡或轉錄差異。Calb1 通過調控細胞內 Ca2?信號，可能影響神經元遷移的動力學或存活能力，從而促進 SDN 的形態建成。值得注意的是，Calb?神經元中包含投射至腹側被蓋區的雄性特異性神經元群，其在性行為調控中具有關鍵作用，提示 Calb1 不僅參與結構分化，還可能通過神經環路影響性別相關行為。

該研究填補了 SDN 發育機制的關鍵空白，揭示了 Calb1 在神經元空間組織中的非經典功能，為理解大腦性別差異的細胞分子基礎提供了新范式。未來研究可進一步探索 Calb1 調控神經元遷移的具體信號通路（如 Ca2?/ 鈣調蛋白依賴的細胞骨架調控），以及性激素如何通過 Calb1 間接影響 SDN 發育。這些發現不僅深化了對正常腦發育的認知，也為性別相關神經疾�。ㄈ缧苑只�異常、性行為障礙）的病理機制研究提供了潛在靶點。