聽力障礙影響著全球15億人，其中感音神經性聽力損失（SNHL）主要由耳蝸毛細胞退化引起，但目前缺乏有效治療手段。作為聽覺信號轉導的核心，耳蝸毛細胞的功能調控機制亟待深入探索。嘌呤能信號系統（通過ATP激活的P2X/P2Y受體）在耳蝸生理和病理過程中扮演關鍵角色，但P2X₄亞型的具體功能尚不明確。為此，新西蘭奧克蘭大學的研究團隊在《Histochemistry and Cell Biology》發表了關于P2X₄受體在Wistar大鼠耳蝸毛細胞中精準定位的研究。

研究采用胚胎期20.5天至成年（6周齡）大鼠的耳蝸組織，通過免疫熒光雙標技術結合共聚焦顯微鏡成像，系統分析了P2X₄的時空表達特征。關鍵實驗技術包括：跨年齡段樣本采集、免疫組織化學（使用特異性抗P2X₄抗體）、共聚焦顯微鏡三維重建、ImageJ圖像定量分析（如JACoP插件共定位分析）等。

P2X₄表達在耳蝸中的分布
研究發現P2X₄在耳蝸 Corti器（OoC）的內毛細胞（IHCs）和外毛細胞（OHCs）中高表達，經肌球蛋白VIIa（Myosin VIIa）雙標確認。值得注意的是，P2X₄在螺旋韌帶和螺旋神經節中僅零星表達，與既往報道的豚鼠耳蝸內皮細胞定位不同，提示物種特異性差異。

P2X₄在毛細胞中的極性分布
通過亞細胞分區分析發現，IHCs中P2X₄信號集中于細胞基底側（靠近內邊界細胞），而OHCs中則形成頂端和基底側的顆粒狀簇。三維重建顯示，IHCs的P2X₄呈梯度分布，可能參與邊界細胞通過連接蛋白（Connexin）釋放ATP的旁分泌調控；OHCs的P2X₄簇則位于表皮板（Cuticular Plate）無肌動蛋白區域下方，暗示其與機械轉導的關聯。

P2X₄與細胞器的共定位特征
共定位分析揭示：IHCs中P2X₄主要與早期內體標志物EEA-1（63.2%）和高爾基體標志物GM130共定位，而OHCs中則更多與溶酶體標志物LAMP-1（32.4%）共定位。這種差異提示P2X₄在兩類毛細胞中可能通過不同細胞器參與鈣離子（Ca²⁺）緩沖或膜循環。此外，在成熟毛細胞基底端觀察到P2X₄與突觸前標記物Ctbp2的部分共定位，暗示其可能參與突觸可塑性調控。

研究意義與展望
該研究首次闡明P2X₄在耳蝸毛細胞中的亞細胞定位圖譜，揭示其通過內體-溶酶體系統調控毛細胞穩態的潛在機制。P2X₄在IHCs中可能響應邊界細胞釋放的ATP，參與Ca²⁺依賴的信號傳導；而在OHCs中，溶酶體定位的P2X₄可能通過調節膜融合影響“耳蝸放大器”功能。這些發現為靶向嘌呤能通路的聽力保護藥物設計提供了理論依據，尤其是針對噪聲損傷或年齡相關性聽力損失中毛細胞功能退化的干預策略。未來研究可進一步探索P2X₄在毛細胞損傷模型中的動態變化及其與其它P2X亞型的協同作用。