《Molecular Brain》：GAS reduced inflammatory responses in activated microglia by regulating the Ccr2/Akt/Gsk-3β pathway
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新生兒缺氧缺血性腦損傷（HIBD）嚴重威脅新生兒生命與神經功能，現有治療手段有限。研究人員探究天麻素（GAS）對 HIBD 的作用，發現 GAS 可調節 Ccr2/Akt/Gsk-3β 通路，減輕炎癥反應，為 HIBD 治療提供新方向。
新生兒缺氧缺血性腦損傷（HIBD）是新生兒死亡和神經系統功能障礙的重要原因，如同隱藏在新生生命中的 “暗礁”，給無數家庭帶來沉重打擊。在圍產期，各種因素導致新生兒大腦缺氧缺血，大腦中的免疫細胞如小膠質細胞被激活，釋放大量炎癥因子，引發神經炎癥，進一步加重腦損傷。目前，臨床治療 HIBD 主要依靠低溫療法，但它并不能完全保護神經，患兒治療后仍面臨神經發育異常和死亡風險。因此，尋找更有效的治療方法迫在眉睫。
昆明醫科大學的研究人員開展了關于天麻素（Gastrodin，GAS）對 HIBD 影響的研究，相關成果發表在《Molecular Brain》雜志上。該研究意義重大，若能明確 GAS 的作用機制，將為 HIBD 的治療開辟新的道路。
研究人員運用了多種關鍵技術方法。在動物實驗方面，構建 HIBD 小鼠模型，將小鼠分為假手術組、HIBD 組和 GAS 預處理（HIBD + GAS）組；細胞實驗中，培養 BV2 小膠質細胞，設置對照組、氧糖剝奪（OGD）組、OGD + GAS 組等多個組別。實驗過程中，采用 RNA 分離和定量實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）、蛋白質免疫印跡法（Western blotting）、免疫熒光標記等技術，檢測相關蛋白和基因的表達。
研究結果如下：
- GAS 抑制 HIBD 小鼠中 Ccl2 和 Ccr2 的 mRNA 表達：qRT-PCR 結果顯示，HIBD 小鼠缺血胼胝體中 Ccl2 和 Ccr2 的 mRNA 水平在損傷后 1 天和 3 天顯著高于假手術組，而 GAS 處理顯著降低了它們的水平。這表明 GAS 能夠抑制 HIBD 小鼠中 Ccl2 和 Ccr2 的 mRNA 表達。
- GAS 降低 HIBD 小鼠中 Ccr2 表達并增加 Akt 和 Gsk-3β 的磷酸化水平：Western blotting 和免疫熒光結果表明，與假手術組相比，HIBD 小鼠缺血胼胝體中 Ccr2 和 TNF-α 的表達水平顯著增加，Akt 和 Gsk-3β 的磷酸化水平顯著降低；GAS 處理后，Ccr2 和 TNF-α 的表達水平顯著降低，Akt 和 Gsk-3β 的磷酸化水平顯著升高。說明 GAS 可以調節 HIBD 小鼠相關蛋白的表達和磷酸化水平。
- GAS 降低 OGD 處理的 BV2 小膠質細胞中 Ccl2 和 Ccr2 的表達，同時增加 Akt 和 Gsk-3β 的磷酸化水平：在 BV2 小膠質細胞實驗中，qRT-PCR、Western blotting 和免疫熒光結果與小鼠實驗類似，即 OGD 組中 Ccl2 和 Ccr2 的 mRNA 和蛋白水平顯著高于對照組，GAS 處理后降低；同時，OGD 組中 Akt 和 Gsk-3β 的磷酸化水平降低，GAS 處理后升高。證明 GAS 在細胞水平也有類似的調節作用。
- GAS 通過 Ccr2/Akt/Gsk-3β 信號通路減輕 OGD 誘導的 BV2 小膠質細胞炎癥：CCK-8 實驗表明 Ccr2 拮抗劑 RS102895 在 0 - 200 ng/mL 范圍內不會導致 BV2 細胞顯著死亡。Western blotting 分析顯示，RS102895 顯著增加 Akt 和 Gsk-3β 的磷酸化水平，降低 TNF-α 和 IL-1β 的表達；且 RS102895 + GAS 處理組與 RS102895 處理組相比，相關蛋白表達無顯著差異。說明 GAS 通過該信號通路減輕炎癥。
研究結論與討論部分指出，HIBD 的炎癥反應與小膠質細胞激活密切相關，Ccl2/Ccr2 軸在其中發揮重要作用，但具體機制尚不清楚。本研究發現 GAS 可顯著降低 HIBD 小鼠和 OGD 誘導的 BV2 小膠質細胞中炎癥因子的表達，調節 Ccr2/Akt/Gsk-3β 信號通路相關蛋白的表達。推測 GAS 可能通過激活 Ccr2 受體調控 Akt/Gsk-3β 通路，抑制炎癥因子表達，發揮神經保護作用。不過，本研究僅使用 Ccr2 拮抗劑 RS102895 探究機制，不夠全面。后續研究計劃采用小膠質細胞 Ccr2 基因敲除小鼠進一步深入研究。
總的來說，該研究揭示了 GAS 對 HIBD 的神經保護作用及潛在機制，為 HIBD 的治療提供了新的靶點和理論依據，有望推動相關治療藥物的研發，為新生兒健康帶來新的希望。
