《Angiogenesis》：The VEGF decoy receptor soluble Fms-like tyrosine kinase 1 binds to macrophages
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在炎癥調控機制未完全明晰的背景下，研究人員開展了 sFLT1 與巨噬細胞相互作用的研究。結果發現 sFLT1 可與巨噬細胞結合，且不同激活狀態影響其結合能力，這為揭示 sFLT1 抗炎機制提供新視角。
在生命的微觀世界里，炎癥與修復時刻都在上演著一場復雜的 “戲劇”�？扇苄� Fms 樣酪氨酸激酶 1（sFLT1）作為其中的 “關鍵角色”，一直以來備受關注。它是血管內皮生長因子（VEGF）的內源性抑制劑，在子癇前期，過高的 sFLT1 水平會導致系統性 VEGF 缺乏，進而引發一系列不良后果，像腎小球功能障礙和內皮病變等 。但除了這些已知的影響，越來越多的證據表明，sFLT1 還具有抗炎特性，在多種炎癥性疾病，如特應性皮炎、動脈粥樣硬化、糖尿病腎病等中，它能顯著減輕慢性炎癥、促進組織修復。然而，sFLT1 到底是如何調控炎癥的，這個問題卻如同迷霧一般，困擾著科研人員。為了揭開這層神秘的面紗，來自萊頓大學醫學中心（Leiden University Medical Center）等多個研究機構的研究人員踏上了探索之旅。他們的研究成果發表在《Angiogenesis》雜志上，為我們深入理解炎癥調控機制帶來了新的曙光。
研究人員為了探究 sFLT1 與巨噬細胞之間的潛在聯系，采用了多種關鍵技術方法。在細胞實驗方面，運用了多種巨噬細胞系進行體外實驗。通過流式細胞術（Flow cytometry）檢測 sFLT1 與巨噬細胞的結合情況；利用 RNA 測序（RNA sequencing，RNAseq）技術分析 sFLT1 對巨噬細胞基因表達的影響；借助質譜（Mass spectrometry）分析來尋找 sFLT1 在巨噬細胞表面的潛在結合蛋白。
下面來看看具體的研究結果。首先是 “sFLT1 與巨噬細胞的結合”，研究人員利用流式細胞術對多種巨噬細胞進行檢測。結果發現，sFLT1 能夠與原代巨噬細胞、THP-1 巨噬細胞以及 RAW264.7 巨噬細胞結合。其中，原代人類單核細胞衍生的巨噬細胞（MDMs）在由 GM-CSF 誘導分化時，sFLT1 可與之結合，而 M-CSF 誘導分化時則不結合；THP-1 單核細胞與 sFLT1 的結合較少，但分化為巨噬細胞后，結合能力顯著增強。這表明巨噬細胞表面結合 sFLT1 是多種巨噬細胞系的保守特性。
接著是 “激活狀態對 sFLT1 結合的影響”，研究人員用 IFN-γ 和 LPS 將 THP-1 巨噬細胞激活為促炎表型，用 IL-4 將其激活為抗炎表型。結果顯示，促炎激活會降低 sFLT1 的結合，而抗炎激活則會顯著增加結合。進一步實驗發現，用未標記的 sFLT1 預孵育 IL-4 激活的巨噬細胞，可劑量依賴性地降低 sFLT1 的結合，這表明這種結合具有特異性。
然后是 “sFLT1 的細胞攝取”，由于 IL-4 激活的巨噬細胞對 sFLT1 的結合水平最高，研究人員便以此為對象進行研究。他們先讓細胞在 4°C 下與 sFLT1 孵育 30 分鐘，洗去未結合的 sFLT1 后，分別在 4°C 和 37°C 下繼續孵育。結果發現，37°C 孵育的細胞表面 sFLT1 檢測量減少，且共聚焦顯微鏡顯示細胞內呈現顆粒狀染色模式，這說明 sFLT1 被 THP-1 巨噬細胞內化。
再看 “sFLT1 對基因表達的調控”，研究人員用 sFLT1 處理 IL-4 激活的 THP-1 巨噬細胞 24 小時后進行 RNA 測序。結果發現，有 22 個基因的表達發生顯著變化（FDR<0.05），其中包括趨化因子受體基因 CX3CR1 和 CCR2，這暗示 sFLT1 可能對細胞遷移有下調作用。后續的 qPCR 和流式細胞術實驗也進一步驗證了這一結果。
最后是 “sFLT1 結合的相關機制”，質譜分析篩選出了多個潛在的結合蛋白，雖未能證實部分蛋白與 sFLT1 的直接相互作用，但發現硫酸乙酰肝素蛋白聚糖神經纖毛蛋白 - 1（NRP1）和 Perlecan（HSPG2）可能與 sFLT1 結合。進一步研究表明，sFLT1 與巨噬細胞的結合依賴于硫酸乙酰肝素的相互作用，且 sFLT1 在巨噬細胞表面可能與神經纖毛蛋白 - 1 形成復合物結合。
在研究結論與討論部分，此次研究揭示了 sFLT1 與巨噬細胞存在直接相互作用，這為 sFLT1 的抗炎機制提供了新的解釋。巨噬細胞的激活狀態會影響 sFLT1 的結合能力，IL-4 激活的抗炎性巨噬細胞與 sFLT1 的結合更強。sFLT1 可能通過與神經纖毛蛋白 - 1 結合，調節巨噬細胞趨化因子受體的表達，進而影響巨噬細胞的遷移和組織定位，發揮抗炎作用。這一發現不僅有助于我們深入理解 sFLT1 在正常生理和病理狀態下的功能，也為相關炎癥性疾病的治療提供了新的潛在靶點和理論依據 。未來，還需要進一步研究 sFLT1 在炎癥相關疾病中的信號傳導通路，以及如何更好地利用這一機制開發新的治療策略，為人類健康帶來更多福祉。
