重磅推薦丨一步法共轉錄加帽,銳博T7 mRNA轉錄試劑盒!

采用優化的Ribo-Cap1,加帽率高,產量高


成熟的真核生物mRNA的5’端帽子結構和3’端poly(A)尾是mRNA有效翻譯的必要結構元件。傳統的mRNA體外合成一般需要轉錄、加帽和加尾,步驟較為繁瑣。

Ribo? T7 mRNA轉錄試劑盒可利用含有T7啟動子序列、AG起始序列和poly(A)尾編碼區的DNA模板,在轉錄過程中摻入合成的帽結構類似物Ribo-Cap1,一步完成成熟mRNA的制備。合成的mRNA能夠被有效翻譯并能逃避細胞先天免疫反應。



Ribo? T7 mRNA轉錄試劑盒

此外,本試劑盒還可根據需求對單個或多個核苷酸單體進行替換,制備特殊化學修飾的mRNA。轉錄合成的mRNA可用于顯微注射、轉染、體外翻譯、mRNA疫苗臨床前研究等下游應用。


產品特點及優勢:

? 操作簡便:采用帽結構類似物Ribo-Cap1,僅需一步共轉錄加帽即可完成Cap1 mRNA的合成
? 加帽率高:一步法共轉錄產物的加帽率可穩定在90%以上
? 產量高:與抗反帽ARCA相比,Ribo-cap1與GTP無競爭,不影響RNA的產率,針對長度300-5000nt的轉錄本,1μg模板投入量可產生70-150μg的mRNA
? 表達效率高:帶有天然Cap1帽的mRNA相較于Cap0帽修飾在真核生物中具有更高的表達效率,并可減少先天免疫刺激

產品結果示例:

示例1:使用Ribo? T7 mRNA轉錄試劑盒合成長度1300nt的mRNA,并檢測mRNA的完整性及大小。結果顯示在1000-2000nt處出現了明顯的條帶,檢測到合成的mRNA大小為1312nt。



mRNA完整性及大小分析

示例2:使用Ribo? T7 mRNA轉錄試劑盒合成長度為4000nt的mRNA,20μL反應體系中加入1μg DNA模板,并檢測不同時間點的mRNA產量。結果顯示反應時間在2h時,mRNA的產量達到峰值。



mRNA合成時間累積曲線

示例3:使用帽類似物Ribo-Cap1加帽,并通過高效液相色譜分析mRNA的加帽率。結果顯示使用Ribo-Cap1共轉錄加帽生成的mRNA,其加帽率達到96%。



mRNA加帽率分析


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C11080-1 Ribo? T7 mRNA Transcription Kit 20T 點擊查看

相關產品:

使用Ribo? T7 mRNA轉錄試劑盒還可合成修飾mRNA,只需要另外準備相應的常規三磷酸核苷和修飾核苷的三磷酸核苷試劑,以及帽子結構類似物Ribo-Cap1試劑,替換試劑盒中的2× rNTP/Ribo-Cap1 Mix即可。體外轉錄反應中的rATP、rUTP、rCTP、rGTP終濃度為7.5 mM,帽子結構類似物Ribo-Cap1的終濃度為10 mM。當需要制備修飾核苷的mRNA時,可使用修飾核苷的三磷酸核苷等量替換對應的常規三磷酸核苷進行體外轉錄反應。

產品編號 產品名稱
C11081-1mL/10mL/100mL ATP(100 mM),1/10/100 mL
C11082-1mL/10mL/100mL UTP(100 mM),1/10/100 mL
C11083-1mL/10mL/100mL CTP(100 mM),1/10/100 mL
C11083-1mL/10mL/100mL GTP(100 mM),1/10/100 mL
C11085-1mL/10mL/100mL 5-Me-CTP(100 mM),1/10/100 mL
C11086-1mL/10mL/100mL 5-Me-CTP(100 mM),1/10/100 mL
C11087-1mL/10mL/100mL Pseudo-UTP(100 mM),1/10/100 mL
C11088-1mL/10mL/100mL N1-Me-Pseudo-UTP(100 mM),1/10/100 mL
C11089-1mL/10mL/100mL Ribo-Cap1(500 mM),1/10/100 mL
C11090-1mL/10mL/100mL T7 RNA Polymerase Mix,1/10/100 mL
C11091-2mL/20mL/200mL 5× T7 Reaction Buffer,2/20/200 mL
C11092-1mL/10mL/100mL DNaseI (RNase-free) (1 U/μL),1/10/100 mL

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